默克生命科学 | 细胞系冻存
资讯
2024-01-22
439
目标
图 1.细胞系冻存
下述实验方案描述了细胞冷冻保存方法,包括采用-80°C冷冻电冰箱冷冻保存细胞系。ECACC 通常使用可编程速率可控冰柜。这是最可靠、最具可重现性的细胞冻存方法,但由于此类设备的成本超出了大多数研究实验室所能承受的范围,因此下文将详细描述其他一些方法。如果需要定期冷冻大量细胞培养物,则建议使用可编程速率可控冰柜。如果感兴趣可以到默克www.sigmaaldrich.cn看具体内容
材料
冷冻培养基(通常为90% FBS、10% DMSO (C6164)或甘油(C6039))
70% (v/v) 乙醇无菌水溶液(793213)
PBS,不含Ca2+ / Mg2+(D8537)
0.05% 胰蛋白酶 / EDTA,溶于HBSS中,不含Ca2+/Mg2+(T3924)
DMSO (D2650)
设备
个人防护装备(无菌手套、实验室工作服)
全脸保护面罩 / 护目镜
设置为37°C的水浴
适当密封水平的微生物安全柜
离心机
细胞计数板(Bright-Line细胞计数板,货号:Z359629,改进型Neubauer-Camlab CCH.AC1)
预先贴好标签的安瓿瓶 / 冷冻管
细胞冷冻装置(例如Nalgene® Mr. Frosty,货号:C1562)
要点
最常用的冷冻保护剂是二甲基亚砜(DMSO),然而,它并不适用于所有细胞系,例如HL60,因为DMSO会诱导这种细胞分化。在这种情况下,应使用甘油等替代品(有关正确的冷冻保护剂详情,请参阅ECACC数据表)。
上面推荐的ECACC冷冻培养基已被证明是适合大多数细胞类型的良好的通用培养基。另一种常用的冷冻培养基配方是:70%基础培养基、20% FBS、10% DMSO,但可能不适用于所有细胞类型。在定期使用之前,请确认是否适用于自身细胞。
至关重要的是,培养物必须是健康的,并处于生长的对数阶段。用预先汇合的培养物(低于其最大细胞密度的培养物),在冷冻之前24小时更换培养基,即可实现这种条件。
冷却速率可以改变,但一般原则是,每分钟降低1至3经证适合于大多数细胞培养物。
Mr. Frosty系统的替代方案是Taylor Wharton被动式冷冻柜,其中的安瓿瓶保存在杜瓦瓶颈的液氮蒸气中。该系统可让安瓿瓶逐渐降低,温度随之而降低。目前也有降温速率可控的冷冻柜,定期冷冻大量安瓿瓶时特别有用。
最后,如果没有任何其他设备可用,可以将安瓿瓶放置在隔热良好的盒子内(例如壁厚至少1 cm的聚苯乙烯盒子),并置于-80下过夜。重要的是必须确保盒子在整个冷冻过程中保持直立。冷冻后的安瓿瓶应转移到液氮储存容器的气相中并记录位置。
如果使用涉及-80°C冰柜的冷冻方法,则必须针对细胞系冷冻分区,避免无意取出样品。如果在冷冻的关键阶段出现这一类误操作,细胞活力会受影响。
图 2.DMSO瓶
图 3.Mr. Frosty容器
操作流程
......
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目标
图 1.细胞系冻存
下述实验方案描述了细胞冷冻保存方法,包括采用-80°C冷冻电冰箱冷冻保存细胞系。ECACC 通常使用可编程速率可控冰柜。这是最可靠、最具可重现性的细胞冻存方法,但由于此类设备的成本超出了大多数研究实验室所能承受的范围,因此下文将详细描述其他一些方法。如果需要定期冷冻大量细胞培养物,则建议使用可编程速率可控冰柜。如果感兴趣可以到默克www.sigmaaldrich.cn看具体内容
材料
冷冻培养基(通常为90% FBS、10% DMSO (C6164)或甘油(C6039))
70% (v/v) 乙醇无菌水溶液(793213)
PBS,不含Ca2+ / Mg2+(D8537)
0.05% 胰蛋白酶 / EDTA,溶于HBSS中,不含Ca2+/Mg2+(T3924)
DMSO (D2650)
设备
个人防护装备(无菌手套、实验室工作服)
全脸保护面罩 / 护目镜
设置为37°C的水浴
适当密封水平的微生物安全柜
离心机
细胞计数板(Bright-Line细胞计数板,货号:Z359629,改进型Neubauer-Camlab CCH.AC1)
预先贴好标签的安瓿瓶 / 冷冻管
细胞冷冻装置(例如Nalgene® Mr. Frosty,货号:C1562)
要点
最常用的冷冻保护剂是二甲基亚砜(DMSO),然而,它并不适用于所有细胞系,例如HL60,因为DMSO会诱导这种细胞分化。在这种情况下,应使用甘油等替代品(有关正确的冷冻保护剂详情,请参阅ECACC数据表)。
上面推荐的ECACC冷冻培养基已被证明是适合大多数细胞类型的良好的通用培养基。另一种常用的冷冻培养基配方是:70%基础培养基、20% FBS、10% DMSO,但可能不适用于所有细胞类型。在定期使用之前,请确认是否适用于自身细胞。
至关重要的是,培养物必须是健康的,并处于生长的对数阶段。用预先汇合的培养物(低于其最大细胞密度的培养物),在冷冻之前24小时更换培养基,即可实现这种条件。
冷却速率可以改变,但一般原则是,每分钟降低1至3经证适合于大多数细胞培养物。
Mr. Frosty系统的替代方案是Taylor Wharton被动式冷冻柜,其中的安瓿瓶保存在杜瓦瓶颈的液氮蒸气中。该系统可让安瓿瓶逐渐降低,温度随之而降低。目前也有降温速率可控的冷冻柜,定期冷冻大量安瓿瓶时特别有用。
最后,如果没有任何其他设备可用,可以将安瓿瓶放置在隔热良好的盒子内(例如壁厚至少1 cm的聚苯乙烯盒子),并置于-80下过夜。重要的是必须确保盒子在整个冷冻过程中保持直立。冷冻后的安瓿瓶应转移到液氮储存容器的气相中并记录位置。
如果使用涉及-80°C冰柜的冷冻方法,则必须针对细胞系冷冻分区,避免无意取出样品。如果在冷冻的关键阶段出现这一类误操作,细胞活力会受影响。
图 2.DMSO瓶
图 3.Mr. Frosty容器
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