dna提取(rna及多糖等杂质)
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2023-11-23
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1. dna提取,rna及多糖等杂质?
提取基因组dna过程中,如何去除蛋白质,多糖和脂类等生物大分子 不同生物(植物、动物、微生物)的基因组DNA的提取方法有所不同; 不同种类或同一种类的不同组织因其细胞结构及所含的成分不同,分离方法也有差 异。在提取某种特殊组织的DNA时必须参照文献和经验建立相应的提取方法, 以获得可用的DNA大分子。
尤其是组织中的多糖和酶类物质对随后的酶切、PCR反应等有较强的抑制作用,因此用富含这类物质的材料提取基因组DNA时, 应考虑除去多糖和酚类物质。 本实验以水稻幼苗为材料,学习基因组DNA提取的一般方法。 DNA 一、材料 水稻幼苗 二、设备 移液器,冷冻高速离心机,台式高速离心机,水浴锅,陶瓷研钵,50ml离 心管(有盖)及5ml和1.5ml离心管,弯成钩状的小玻棒。 三、试剂 1、提取缓冲液?:100mmol/L Tris?Cl, pH8.0, 20mmol/L EDTA, 500mmol/L NaCl, 1.5% SDS。 2、提取缓冲液?:18.6g葡萄糖,6.9g二乙基二硫代碳酸钠,6.0gPVP,240ul巯基乙醇,加水至300ml。
3、80:4:16/氯仿:戊醇:乙醇 4、 RnaseA母液:配方见第一章。
5、其它试剂:液氮、异丙醇、TE缓冲液,无水乙醇、70%乙醇、3mol/L NaAc。 四、操作步骤:
(一)水稻幼苗或其它禾木科植物基因组DNA提取 1. 在50ml离心管中加入20ml提取缓冲液?, 60?水浴预热。
2. 水稻幼苗或叶子5-10g, 剪碎, 在研钵中加液氮磨成粉状后立即倒入预热 的离心管中, 剧烈摇动混匀, 60?水浴保温30-60分钟(时间长,DNA产量高), 不时摇动。
3. 加入20ml氯仿/戊醇/乙醇溶液, 颠倒混匀(需带手套, 防止损伤皮肤),室温下静置5-10分钟, 使水相和有机相分层(必要时可重新混匀)。
4. 室温下5000rpm离心5分钟。
5. 仔细移取上清液至另一50ml离心管,加入1倍体积异丙醇,混匀,室温下放置片刻即出现絮状DNA沉淀。 6. 在1.5ml eppendorf中加入1ml TE。用钩状玻璃棒捞出DNA絮团,在干净吸水纸上吸干,转入含TE的离心管中,DNA很快溶解于TE。 7. 如DNA不形成絮状沉淀,则可用5000rpm离心5分钟, 再将沉淀移入TE管中。这样收集的沉淀,往往难溶解于TE,可在60?水浴放置15分钟以上,以帮助溶解。 8. 将DNA溶液3000rpm离心5分钟, 上清液倒入干净的5ml离心管。 9. 加入5μl RNaseA(10μg/μl), 37? 10分钟, 除去RNA(RNA对DNA的操作、分析一般无影响,可省略该步骤)。 10. 加入1/10体积的3mol/L NaAc及2×体积的冰乙醇,混匀,-20?放置20分钟左右,DNA形成絮状沉淀。
2. 骨头里能提取DNA的吗?
能提取。可以提取DNA,虽然比活组织及非活组织其它部位来说相对困难,但非活组织骨组织内提取DNA是完全可能的,有不少实例证明。
3. 提取dna的方法及步骤?
提取DNA的常用方法包括细胞破碎、蛋白质去除、DNA沉淀和洗涤等步骤。
首先,将待提取DNA的细胞破碎,释放DNA。
然后,通过加入蛋白酶等去除蛋白质。
接下来,加入盐溶液使DNA沉淀,离心沉淀DNA。
最后,用酒精洗涤沉淀的DNA,去除杂质。提取的DNA可以用于PCR、测序等分子生物学实验。
4. 请问如何从香蕉中提取DNA?
1. 取30g香蕉,15gNaCl,5ml洗涤剂,一同加入研钵中,充分研磨5min。
2. 用纱布搭在烧杯上,将混合物过滤。滤液加入离心管中。
3. 将离心管放入离心机中,以1500r/min的转速离心3min。分次离心,用吸管吸取离心管中清液,加入小烧杯中,合并离心液。
4. 将离心液在冰箱冷藏室放置5min(若有沉淀,取上清液)
5. 将冷却的95%酒精(大约2倍与上清液)加入烧杯中。沿一个方向轻轻搅拌(注意:玻璃棒不能触碰烧杯底部)有丝状物(即香蕉DNA)出现。静置。有更多絮状物出现,用玻璃棒轻轻缠起。
5. DNA怎么提取?
提取DNA的方法可以根据样本的类型和实验室设备的可用性而有所不同。以下是一种常见的DNA提取方法,称为酚/氯仿提取法:
1. 细胞破碎:首先,需要将样本中的细胞破碎,以释放细胞内的DNA。这可以通过机械方法(如搅拌或研磨)或化学方法(如细胞裂解液)来实现。
2. 细胞裂解:接下来,使用细胞裂解液来破坏细胞膜和核膜,释放DNA。细胞裂解液通常包含盐和洗涤剂,以破坏细胞膜和核膜的结构。
3. DNA沉淀:将酚/氯仿混合液加入细胞裂解液中,形成两个不相溶的相。DNA会在酚相中沉淀,而其他细胞组分则会留在氯仿相中。
4. DNA洗涤:将DNA沉淀从酚相中分离出来,并进行洗涤以去除残留的盐和洗涤剂。这可以通过漂洗DNA沉淀,使用乙醇洗涤和离心等步骤来实现。
5. DNA溶解:最后,将洗涤后的DNA溶解在适当的缓冲液中,以便进行后续的实验或分析。
需要注意的是,DNA提取是一项复杂的实验技术,需要在实验室环境中进行,并且需要遵循严格的操作规程和安全措施。对于初学者或非专业人士来说,最好在有经验的实验室或寻求专业帮助下进行DNA提取。
6. 唾液DNA鉴定怎么采集样本?
所谓的DNA鉴定唾液样本其实是口腔黏膜细胞,采集的时候需要注意:
1.采集前用清水漱口,然后准备一张白纸,取医用消毒棉签,伸入口腔,靠近脸颊内侧来回刮拭十几下,不时旋转棉棒,充分接触口腔黏膜。
2.取出棉签,放在白纸上自然晾干。
3.同样方法在两边脸颊分别刮拭,取得两根棉签,自然晾干,做好标记,用白纸包好,放入信封中。
4.重复步骤,取另一个人的口腔黏膜上皮细胞。每个人的样本分别放在不同的信封中,用特快专递尽快邮寄。白求恩遗传医学中心,解放军专业亲子鉴定中心
7. 人工化学合成dna的化学方法?
第一步:目的基因的获取
1. 编码蛋白质的结构基因 。
2.原核基因采取直接分离获得,真核基因是人工合成。
3.PCR技术扩增目的基因
(1)原理:DNA双链复制
(2)过程:第一步:加热至90~95℃DNA解链;第二步:冷却到55~60℃,引物结合到互补DNA链;第三步:加热至70~75℃,热稳定DNA聚合酶从引物起始互补链的合成。
第二步:基因表达载体的构建
1.使目的基因在受体细胞中稳定存在,并且可以遗传至下一代,使目的基因能够表达和发挥作用。
2.组成:目的基因+启动子+终止子+标记基因
第三步:将目的基因导入受体细胞_
转化方法:
将目的基因导入植物细胞:采用最多的方法是 农杆菌转化法。
将目的基因导入动物细胞:最常用的方法是 显微注射技术。此方法的受体细胞多是 受精卵。
3.重组细胞导入受体细胞后,筛选含有基因表达载体受体细胞的依据是标记基因是否表达。
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1. dna提取,rna及多糖等杂质?
提取基因组dna过程中,如何去除蛋白质,多糖和脂类等生物大分子 不同生物(植物、动物、微生物)的基因组DNA的提取方法有所不同; 不同种类或同一种类的不同组织因其细胞结构及所含的成分不同,分离方法也有差 异。在提取某种特殊组织的DNA时必须参照文献和经验建立相应的提取方法, 以获得可用的DNA大分子。
尤其是组织中的多糖和酶类物质对随后的酶切、PCR反应等有较强的抑制作用,因此用富含这类物质的材料提取基因组DNA时, 应考虑除去多糖和酚类物质。 本实验以水稻幼苗为材料,学习基因组DNA提取的一般方法。 DNA 一、材料 水稻幼苗 二、设备 移液器,冷冻高速离心机,台式高速离心机,水浴锅,陶瓷研钵,50ml离 心管(有盖)及5ml和1.5ml离心管,弯成钩状的小玻棒。 三、试剂 1、提取缓冲液?:100mmol/L Tris?Cl, pH8.0, 20mmol/L EDTA, 500mmol/L NaCl, 1.5% SDS。 2、提取缓冲液?:18.6g葡萄糖,6.9g二乙基二硫代碳酸钠,6.0gPVP,240ul巯基乙醇,加水至300ml。
3、80:4:16/氯仿:戊醇:乙醇 4、 RnaseA母液:配方见第一章。
5、其它试剂:液氮、异丙醇、TE缓冲液,无水乙醇、70%乙醇、3mol/L NaAc。 四、操作步骤:
(一)水稻幼苗或其它禾木科植物基因组DNA提取 1. 在50ml离心管中加入20ml提取缓冲液?, 60?水浴预热。
2. 水稻幼苗或叶子5-10g, 剪碎, 在研钵中加液氮磨成粉状后立即倒入预热 的离心管中, 剧烈摇动混匀, 60?水浴保温30-60分钟(时间长,DNA产量高), 不时摇动。
3. 加入20ml氯仿/戊醇/乙醇溶液, 颠倒混匀(需带手套, 防止损伤皮肤),室温下静置5-10分钟, 使水相和有机相分层(必要时可重新混匀)。
4. 室温下5000rpm离心5分钟。
5. 仔细移取上清液至另一50ml离心管,加入1倍体积异丙醇,混匀,室温下放置片刻即出现絮状DNA沉淀。 6. 在1.5ml eppendorf中加入1ml TE。用钩状玻璃棒捞出DNA絮团,在干净吸水纸上吸干,转入含TE的离心管中,DNA很快溶解于TE。 7. 如DNA不形成絮状沉淀,则可用5000rpm离心5分钟, 再将沉淀移入TE管中。这样收集的沉淀,往往难溶解于TE,可在60?水浴放置15分钟以上,以帮助溶解。 8. 将DNA溶液3000rpm离心5分钟, 上清液倒入干净的5ml离心管。 9. 加入5μl RNaseA(10μg/μl), 37? 10分钟, 除去RNA(RNA对DNA的操作、分析一般无影响,可省略该步骤)。 10. 加入1/10体积的3mol/L NaAc及2×体积的冰乙醇,混匀,-20?放置20分钟左右,DNA形成絮状沉淀。
2. 骨头里能提取DNA的吗?
能提取。可以提取DNA,虽然比活组织及非活组织其它部位来说相对困难,但非活组织骨组织内提取DNA是完全可能的,有不少实例证明。
3. 提取dna的方法及步骤?
提取DNA的常用方法包括细胞破碎、蛋白质去除、DNA沉淀和洗涤等步骤。
首先,将待提取DNA的细胞破碎,释放DNA。
然后,通过加入蛋白酶等去除蛋白质。
接下来,加入盐溶液使DNA沉淀,离心沉淀DNA。
最后,用酒精洗涤沉淀的DNA,去除杂质。提取的DNA可以用于PCR、测序等分子生物学实验。
4. 请问如何从香蕉中提取DNA?
1. 取30g香蕉,15gNaCl,5ml洗涤剂,一同加入研钵中,充分研磨5min。
2. 用纱布搭在烧杯上,将混合物过滤。滤液加入离心管中。
3. 将离心管放入离心机中,以1500r/min的转速离心3min。分次离心,用吸管吸取离心管中清液,加入小烧杯中,合并离心液。
4. 将离心液在冰箱冷藏室放置5min(若有沉淀,取上清液)
5. 将冷却的95%酒精(大约2倍与上清液)加入烧杯中。沿一个方向轻轻搅拌(注意:玻璃棒不能触碰烧杯底部)有丝状物(即香蕉DNA)出现。静置。有更多絮状物出现,用玻璃棒轻轻缠起。
5. DNA怎么提取?
提取DNA的方法可以根据样本的类型和实验室设备的可用性而有所不同。以下是一种常见的DNA提取方法,称为酚/氯仿提取法:
1. 细胞破碎:首先,需要将样本中的细胞破碎,以释放细胞内的DNA。这可以通过机械方法(如搅拌或研磨)或化学方法(如细胞裂解液)来实现。
2. 细胞裂解:接下来,使用细胞裂解液来破坏细胞膜和核膜,释放DNA。细胞裂解液通常包含盐和洗涤剂,以破坏细胞膜和核膜的结构。
3. DNA沉淀:将酚/氯仿混合液加入细胞裂解液中,形成两个不相溶的相。DNA会在酚相中沉淀,而其他细胞组分则会留在氯仿相中。
4. DNA洗涤:将DNA沉淀从酚相中分离出来,并进行洗涤以去除残留的盐和洗涤剂。这可以通过漂洗DNA沉淀,使用乙醇洗涤和离心等步骤来实现。
5. DNA溶解:最后,将洗涤后的DNA溶解在适当的缓冲液中,以便进行后续的实验或分析。
需要注意的是,DNA提取是一项复杂的实验技术,需要在实验室环境中进行,并且需要遵循严格的操作规程和安全措施。对于初学者或非专业人士来说,最好在有经验的实验室或寻求专业帮助下进行DNA提取。
6. 唾液DNA鉴定怎么采集样本?
所谓的DNA鉴定唾液样本其实是口腔黏膜细胞,采集的时候需要注意:
1.采集前用清水漱口,然后准备一张白纸,取医用消毒棉签,伸入口腔,靠近脸颊内侧来回刮拭十几下,不时旋转棉棒,充分接触口腔黏膜。
2.取出棉签,放在白纸上自然晾干。
3.同样方法在两边脸颊分别刮拭,取得两根棉签,自然晾干,做好标记,用白纸包好,放入信封中。
4.重复步骤,取另一个人的口腔黏膜上皮细胞。每个人的样本分别放在不同的信封中,用特快专递尽快邮寄。白求恩遗传医学中心,解放军专业亲子鉴定中心
7. 人工化学合成dna的化学方法?
第一步:目的基因的获取
1. 编码蛋白质的结构基因 。
2.原核基因采取直接分离获得,真核基因是人工合成。
3.PCR技术扩增目的基因
(1)原理:DNA双链复制
(2)过程:第一步:加热至90~95℃DNA解链;第二步:冷却到55~60℃,引物结合到互补DNA链;第三步:加热至70~75℃,热稳定DNA聚合酶从引物起始互补链的合成。
第二步:基因表达载体的构建
1.使目的基因在受体细胞中稳定存在,并且可以遗传至下一代,使目的基因能够表达和发挥作用。
2.组成:目的基因+启动子+终止子+标记基因
第三步:将目的基因导入受体细胞_
转化方法:
将目的基因导入植物细胞:采用最多的方法是 农杆菌转化法。
将目的基因导入动物细胞:最常用的方法是 显微注射技术。此方法的受体细胞多是 受精卵。
3.重组细胞导入受体细胞后,筛选含有基因表达载体受体细胞的依据是标记基因是否表达。
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